NeruoPrime Cerebral inducer Medium Kit
NeruoPrime series全腦類器官誘導試劑盒
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? 產品是無菌的，產品外包裝是非無菌的，請在使用前對產品外包裝充分消毒。 ? 產品一經拆封，應妥善存放以確保產品的無菌性。
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1、 產品描述
NeruoPrime series全腦類器官誘導試劑盒是模基生物以神經外胚層自分化體系為研發基礎的一款腦區不定向分化試劑盒，通過四種組分完成經典的腦類器官分化流程即：神經外胚層分化、神經上皮出芽及神經管形成、神經擴張、腦成熟。誘導過程需要植入EB球于低生子因子基質膠(貨號：082703)，誘導38天以上的全腦類器官表達TUJ1、SOX2、Nestin、NeuN等基礎神經表征、FOGX1、CTIP2等前腦、皮層表征,進入長期培養后≥80天可少量表達GFAP、TH等功能神經元及膠質細胞Marker。
2、 產品信息
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產品名稱 |
產品貨號 |
試劑盒組分 |
規格 |
試劑盒組分貨號 |
存儲/運輸 |
保質期 |
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NeruoPrime series 全腦類器官誘導試劑盒 |
ML-0827N05 |
神經外胚層誘導培養基(Neuroectodermal induction Medium) |
50 mL |
ML-0827N05A |
-20°C |
24個月 |
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神經出芽誘導培養基(NeuroBud Induction Medium) |
100 mL |
ML-0827N05B |
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神經成熟培養基(NeuroMaturation Medium) |
100 mL |
ML-0827N05C |
3、 其他自備材料和試劑
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產品名稱 |
產品貨號 |
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低生長因子金牌無酚紅基質膠 |
082703 |
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NeruoPrime series 腦類器官長期培養試劑盒 |
ML-0827N06 |
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StemGrowth series EBs 形成培養基 |
ML-0827S07 |
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StemGrowth series 水解酶溫和消化液 |
ML-0827S03 |
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StemGrowth series多能干細胞金牌培養基 |
ML-0827S04 |
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StemGrowth series 抗脅迫補充劑 1000x |
ML-0827S10 |
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StemGrowth series 消化液 |
ML-0827S08 |
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超低黏附96孔u底板 |
ML-0827P12 |
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超低黏附6孔培養皿 |
ML-0827P13 |
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8-12通道排槍 |
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水平板式離心機 |
- |
4、 模基生物推薦用細胞系
H1、H9、HN4、iPSCs帕金森患者來源DY043、iPSC-EGFP等
5、 新手須知
NeruoPrime series 腦類器官誘導試劑盒理論上可以形成至少98個腦類器官，但是建議每次誘導以1/2個六孔板啟動分化流程，形成至少98個均一大小EB球進行全腦誘導流程。
注意事項：在使用時應始終穿戴防護服，在處理諸如人體細胞或其他生物及有害物質時應遵循安全的實驗室規程。
僅用于科學研究。
6、 使用說明
a) 實驗用品
低生長因子基質膠、StemGrowth series 多能干細胞金牌培養基、StemGrowth series EBs形成培養基、全腦類器官誘導試劑盒、超低黏附96孔u底板/超低黏附6孔培養皿
b) 使用程序：
b.1、PSC細胞培養及EB球誘導
1、 根據不同PSC細胞系的特性從ESC＜60P、iPSC＜50P中復蘇一支細胞、經過兩次高質量傳代記作復蘇后P3（干細胞培養操作見StemGrowth series多能干細胞金牌培養基 /StemGrowth UniMediX GoldenHold Medium培養SOP）
2、 PSC傳代后細胞克隆密度達到80%，10x顯微鏡下觀測克隆邊緣圓潤光滑、干性維持良好即可進行EBs誘導，誘導克隆匯合時間計4-7天。
3、 對于6孔板中的3孔，80%密度的PSC，準備12 mL的StemGrowth serie EBs形成培養基補充12 μL的StemGrowth serie抗脅迫補充劑。準備3 mL StemGrowth serie水解酶溫和消化液添加3 μL StemGrowth serie 抗脅迫補充劑、準備50 mL DPBS無菌不含鈣鎂，和10 mL DMEM/F12預熱到室溫。
4、 使用不含鈣鎂的室溫DPBS洗滌六孔板的三個孔一遍，棄掉DPBS，每孔加入1 mL的StemGrowth serie水解酶溫和消化液37℃消化7-10 min。
5、 鏡下觀察細胞的消化情況、直到細胞邊緣變的透亮且連片飄起即可終止消化，每孔加入1 mL的DMEM/F12中和消化液，吹打至細胞完全脫落且成單細胞型態，進行臺盼藍計數細胞活力高于90%即可進行下一步誘導。
6、 130 g/3 min離心收集到的6 mL細胞懸浮液，棄掉上清加入12 mL的StemGrowth series EBs形成培養基1xStemGrowth series 抗脅迫補充劑,再次檢測細胞活力和細胞計數，最終每mL的細胞量在50000-80000之間最佳。
7、 準備一個超低黏附的96孔u底板，將12 mL的細胞懸液（含1xStemGrowth series抗脅迫補充劑)加入加樣槽中，使用排槍/移液槍每孔加入100 μL的細胞懸液。加樣完成后將培養皿用封口膜封好使用水平板式離心機1200 rpm/3 min離心。
8、 撕掉封口膜放入細胞培養箱培養過夜、第二天每孔加入100 μL StemGrowth series EBs形成培養基不含StemGrowth series抗脅迫補充劑。
9、 48小時后懸浮的細胞即可聚集成球，邊緣光滑圓潤的EBs狀態最佳。
注意！PSC克隆出現問題、自分化及漂浮的情況應再啟動復蘇擴增一株，不可直接用于誘導
b.2、神經外胚層誘導
1、 將誘導48小時的EBs轉移到超低黏附6孔板里，每孔加入10個EBs后使用DPBS洗滌一次清除上個階段的培養基殘留，吸棄DPBS后每孔加入2 mL的神經外胚層誘導培養基，將超低六孔板放置于水平搖床(80 rpm/min)里37度培養，每2天換液一次，誘導共4天。
注意！EBs形成后的全部階段都要上搖床!
2、 出現神經外胚層擴張的EB邊緣變的透亮，直徑＞400 μm，內部致密無空腔，整體呈現類似小鼠原代神經球的型態。
b.3、神經出芽
1、 當EBs直徑達到相關標準時400-600 μm即可進行基質膠包埋，4度化凍分裝的低生長因子基質膠（082703）2 mL。
2、 準備一張長寬均10 cm的封口膜，用離心管底部在200 μL槍頭盒的支撐架上按壓出凹點，按著槍頭孔一個一個輕輕壓，放置于10 cm皿，使用酒精浸泡2-5分鐘，拿出來后放干凈的10 cm皿里，風干后置于安全柜紫外烘干30 min以上即可使用。
3、 使用寬口10-100 μL移液槍頭(量程50 μL)吸取神經外胚層分化結束的EB與按壓的凹點上，一次建議操作10個為佳。之后使用移液槍小心的吸棄凹點內的培養基殘留后，每個凹點及EBs加入30μL的低生長因子膠小心包埋EBs，如若EBs在膠體邊緣則使用10 μL小槍頭輕輕挑弄EBs周圍的膠體讓其置于中央部位。(注意不要形成氣泡)
4、 將包埋好的EBs蓋好，放于37度凝膠15 min后使用無菌的鑷子夾起封口膜，用1 mL的神經出芽培養基將每排的EBs膠體貼著凹點的底部吹到超低黏附六孔板中，每孔最多放置10個類器官，每孔培養基體積不能大于3 mL。
5、 如若一次性制作太多EBs，也可以直接將預冷30 min以上的12 mL的神經出芽培養基補充10%的低生長因子基質膠（貨號：082703)，即1.2 mL的膠體，漩渦混勻后。吸棄原孔板中的神經外胚層誘導培養基，每孔補充3mL神經出芽培養基+基質膠，放置于水平搖床(80 rpm/min)里37度誘導48小時后吸棄培養基，使用DPBS洗滌兩次，再次加入3 mL每孔不含基質膠的神經出芽培養基進行第6步操作。
6、 將超低六孔板放置于水平搖床(80 rpm/min)里37度培養18天完成神經上皮的擴張，每兩天換液一次。EBs一般在神經上皮擴張第4天的時候出現早期VZ、SVZ樣的結構、12天后芽點慢慢匯合變黑。
b.4、神經及腦成熟
當EBs中心致密、外層形成疏松的上皮結構且直徑大于1 mm說明神經擴張到成熟階段，完全棄去神經出芽培養基，每孔加入3 mL的神經成熟培養基持續培養至38天后(每兩天換液一次/水平搖床80 rpm/min培養)，EBs的直徑大于2 mm時內部會出現營養無法滲入的情況，需要使用1 mL注射器將EBs周圍的膠體小心的去掉后每孔加入3 mL腦成熟長期培養基(每天換液)，并提高搖床轉速至120 rpm/min改善營養循環狀態，讓腦類器官可以長期培養＞100天。
V1.4版
更新時間：2025/11/24
