MembraGuard digestive Solution
StemGrowth series 消化液
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1、 產(chǎn)品描述
StemGrowth series MembraGuard Digestive Solution 是一種基于化學(xué)螯合原理的無(wú)酶細(xì)胞解離液，專為胚胎干細(xì)胞（ESC）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）設(shè)計(jì)。其核心機(jī)制是利用主要螯合劑乙二酸化合物解離細(xì)胞間隙連接。該溶液補(bǔ)充了碳酸氫鹽、葡萄糖和Hepes構(gòu)成緩沖系統(tǒng)以維持穩(wěn)定pH，并添加氯化鉀、氯化鈉等離子調(diào)節(jié)滲透壓，使其高度模擬胚胎內(nèi)環(huán)境。此優(yōu)化配方可在5至8分鐘內(nèi)高效完成ESC或iPSCs的溫和解離、消化及傳代所需的細(xì)胞團(tuán)塊處理。
2、 產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
存儲(chǔ)/運(yùn)輸 |
保質(zhì)期 |
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StemGrowth series 消化液 |
ML-0827S08 |
100mL |
常溫 |
12個(gè)月 |
3、 使用說(shuō)明
StemGrowth series MembraGuard digestive Solution 請(qǐng)勿于-20攝氏度上凍。
注意事項(xiàng)：在使用時(shí)應(yīng)始終穿戴防護(hù)服，在處理諸如人體細(xì)胞或其他生物及有害物質(zhì)時(shí)應(yīng)遵循安全的實(shí)驗(yàn)室規(guī)程。
1、 PSC傳代條件：
細(xì)胞匯合度達(dá)85%左右，一般情況下每4-8天傳代；
細(xì)胞匯合度較低，生長(zhǎng)密度分布不均勻情況下請(qǐng)?jiān)u估狀態(tài)在傳代。
注：即使克隆團(tuán)較小、匯合度不足，也建議不要連續(xù)培養(yǎng)超過(guò)10天。
2、 傳代比例：可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)需要按1:6~1:12的比例進(jìn)行傳代，如果細(xì)胞正常，克隆團(tuán)匯合度85%，大小均勻，建議按照1:12進(jìn)行傳代，如果密度偏低，則可降低傳代比例；密度偏高，則增加傳代比例。
注：1:12傳代就是1個(gè)孔傳12個(gè)孔（以6孔板為例）。
3、 將Matrigel包被的6孔板，提前放置培養(yǎng)箱中約1小時(shí)（~37℃）。
4、 根據(jù)傳代接種的孔數(shù)準(zhǔn)備2 mL/孔的StemGrowth多能干細(xì)胞金牌培養(yǎng)基，并按1：1000比例加入StemGrowth series抗脅迫補(bǔ)充劑，恢復(fù)至室溫（~25℃）。
5、 將孔內(nèi)培養(yǎng)基吸取，加入2 mL/孔的DPBS（不含鈣鎂），輕輕搖晃并吸取。
6、 加入2 mL/孔的 StemGrowth series消化液 使溶液完全覆蓋孔底。
7、 置于37℃培養(yǎng)箱中孵育5-7 min。
注：① 消化5 min后鏡下觀察細(xì)胞變化，當(dāng)大部分細(xì)胞變亮變圓，且細(xì)胞尚未脫離基質(zhì)或漂起時(shí)即可終止消化，若大部分細(xì)胞仍未變亮，則需要延長(zhǎng)消化時(shí)間；② 保持6孔板與培養(yǎng)箱金屬隔板直接接觸，使6孔板受熱均勻，不要疊放。
8、 消化結(jié)束后輕輕地將細(xì)胞培養(yǎng)板拿回生物安全柜，避免震蕩搖晃細(xì)胞，傾斜并吸除StemGrowth series消化液。
9、 及時(shí)加入1-2 mL/孔預(yù)溫的StemGrowth多能干細(xì)胞金牌培養(yǎng)基+1X StemGrowth series抗脅迫補(bǔ)充劑，輕柔吹打小于3下使下細(xì)胞脫落。有部分細(xì)胞（10%～15%）未脫離基質(zhì)是正常現(xiàn)象。
10、 吸取6孔板中的Matrigel溶液，加入預(yù)溫的StemGrowth多能干細(xì)胞金牌培養(yǎng)基+1 X StemGrowth series抗脅迫補(bǔ)充劑2 mL/孔。
11、 在6孔板上標(biāo)記細(xì)胞名稱、代次、傳代比例、日期、操作人。將步驟9獲得的細(xì)胞懸液輕輕搖勻，按預(yù)先設(shè)定的傳代比例均勻分配于孔板中。
注：為了鋪板均勻并降低對(duì)細(xì)胞的損傷，可以將步驟9獲得的細(xì)胞懸液收集至1.5 mL離心管，輕柔顛倒混勻細(xì)胞1-2次；再按照傳代比例接種。
12、 接種后，水平十字搖勻6孔板三次，置于37℃，5% CO2濃度，飽和濕度的培養(yǎng)箱中， 再次水平十字搖勻6孔板三次，培養(yǎng)過(guò)夜。
13、 18-24小時(shí)后更換新StemGrowth多能干細(xì)胞金牌培養(yǎng)基，此后每天換液，4-8天后繼續(xù)傳代/凍存。
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培養(yǎng)容器 （孔數(shù)）/復(fù)蘇比例 |
底面積 |
細(xì)胞懸浮液 （μL） |
傳代工作液 |
hPSC培養(yǎng)基 |
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6孔板（1管 / 2孔） |
9.6 cm2/孔 |
40 μL/孔 |
2 mL/孔 |
2 mL/孔 |
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12孔板（1管 / 4孔） |
4.5 cm2/孔 |
15 μL/孔 |
1 mL/孔 |
1 mL/孔 |
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24孔板（1管 / 8孔） |
8 cm2/孔 |
8 μL/孔 |
0.5 mL/孔 |
0.5 mL/孔 |
表1：hESC/iPSC傳代&培養(yǎng)操作試劑推薦用量
V1.1版
更新時(shí)間：2025/06/23
